Keystone Virus izolovaný od floridského teenagera s vyrážkou a subjektivní horečkou: další endemický Arbovirus v jihovýchodních Spojených státech?

Abstrakt

Keystone virus, Kalifornie-séroskupiny viry orthobunyavirus, byl poprvé izolován v roce 1964 z komárů v Keystone, Florida. Tam byly žádné předchozí zprávy z izolace od lidí, přes studie naznačuje, že ~20% osob žijících v regionu jsou séropozitivní. Hlásíme izolaci viru od teenagera z Floridy s vyrážkou a horečkou.

vznik Zika virus (ZIKV) a průběžné identifikace Chikungunya, virus Dengue a virových infekcí, přinesly rostoucí obavy o endemicity a šíření arboviruses ve Spojených Státech. Keystone virus (KEYV; Rod Orthobunyavirus, rodina Peribunyaviridae), člen Kalifornské séroskupiny orthobunyavirus, byl poprvé izolován od komárů v Keystone na Floridě (poblíž Tampa Bay) v roce 1964 . Následné studie prokázaly široké distribuce viru v komárů, zejména Aedes atlanticus, stejně jako veverky, mývalové, a whitetail jelen, v pobřežní oblasti táhnoucí se od Chesapeake Bay na jih přes Floridu, a jako daleký západ jako v Texasu .

ve studiích prováděných na lidské populaci v 60. letech byla míra séropozitivity v rozmezí 19-21%. Nicméně, skutečná izolace KEYV od lidí nebyla nikdy dříve hlášena, ani nebyl KEYV spojen s klinickým syndromem u lidí, navzdory zjevné endemicitě u zvířat a komárů.

kazuistika

16letý dříve zdravý muž předložený v srpnu 2016 na klinice urgentní péče v severo-centrální Floridě s anamnézou nízké horečky a difúzní kožní vyrážky. Pacient hlásil, že se večer předtím cítil „teplý“, přičemž jeho rodiče odhadovali teplotu v rozmezí ~100°F. Ráno se objevila erytematózní papulární vyrážka, která začala na hrudi a postupně se rozšířila do břicha, paže, zad a obličeje. Nebyly žádné vezikuly a vyrážka byla bezbolestná a nepruritická. Zhoršilo ho teplo a sluneční světlo. Pacient popřel zimnici, bolest hlavy, ztuhlost krku nebo gastrointestinální příznaky. Zaznamenal mírnou únavu a nepohodlí v kotníku,což připisoval souběžné účasti na letním táboře pro účastníky pochodové kapely, na sobě nové boty kapely. Předchozí týden byl pacientovi diagnostikována možná tonzilitida a byl zařazen na terapii amoxicilinem v dávce 500 mg perorálně 3krát denně, kterou následující den sám přerušil. Neměl žádné relevantní minulé lékařské nebo chirurgické historii; není známo, že imunosupresivní nebo vrozené vady; žádné známé alergie; žádné nedávné cesty mimo central Florida; a ne vystavení hospodářství nebo hospodářská zvířata. Dostal všechny doporučené dětské očkování. Žádní další členové rodiny nebyli nemocní. Pacient a jeho rodina se přestěhovali na Floridu z Kansasu (kde nebyl identifikován virus Keystone) 4 roky před hlášenou nemocí. Tábor kapely, který navštěvoval, pokračoval až do večera a hlásil, že byl mnohokrát pokousán komáry, navzdory aplikaci diethyltoluamidu (běžně známého jako DEET).

Na vyšetření na klinice, měl teplotu 98.5°F (36.9°C), puls 69 tepů/minutu, dechová frekvence 12 dechů/minutu a krevní tlak o 122/82 mm/Hg. Byla zaznamenána difúzní, erytematózní, papulární vyrážka trupu, paže a obličeje (Obrázek 1). Pacientova hlava, krk, respirační, kardiovaskulární a břišní vyšetření byly normální. Rychlý Monospotový test provedený na klinice byl negativní. Se souhlasem pacienta a jeho rodičů byly odebrány vzorky slin a moči. Vyrážka ustoupila o 2 dny později, bez další horečky. Následně užíval amoxicilin bez výskytu vyrážky.

Obrázek 1.

vyrážka pozorovaná u 16letého pacienta.

Obrázek 1.

vyrážka pozorovaná u 16letého pacienta.

VIROVÉ IDENTIFIKACE/IZOLACE

Reverzní Transkripce Polymerázové Řetězové Reakce Obrazovky

Jako pacientka s anamnézou vyrážka a horečka, v období, kdy ZIKV vypuknutí se děje v Florida, sliny a vzorky moči byly testovány a byly negativní na ZIKV, Chikungunya virus, Dengue virus sérotypu 1-4 genomické ribonukleová kyselina (RNA) pomocí reverzní transkripce polymerázové řetězové reakce (RT-PCR) . Možnost etiologie alfaviru nebo flaviviru byla dále hodnocena provedením RT-PCR pomocí univerzálních primerů, které detekují alfaviry a flaviviry v Brazílii . Vzorky slin i moči byly negativní na alfavirus a flavivirus vrna, zatímco pozitivní kontroly fungovaly podle očekávání(údaje nejsou uvedeny).

Objektivní Reverzní Transkripce Polymerázové Řetězové Reakce a Sekvenování pro Identifikaci Domnělé Virové původce choroby

Nějaký virus identita byla získána následující změnu postupu jsme již dříve popsané ; podrobné metody jsou uvedeny v doplňujících údajích přiložených k tomuto dokumentu. Virová genomová RNA (a / nebo deoxyribonukleová kyselina) byla extrahována z virionů Pomocí Mini Kit QIAamp Viral RNA (Qiagen Inc.). PCR amplikony byly čištěny (Qiagen QIAquick PCR purification kit) a-sledoval s Taq DNA polymerase (New England Biolabs). Amplikony PCR s ocasem byly poté TA-klonovány a vložky byly sekvenovány pomocí sangerova sekvenování. Z celkového počtu 40 plasmidy s TA-klonovaných vložky (20 vložkami z moči, 20 ze slin), 1 z moči obsahoval 166-bp vložka s 99% identitu Keystone virus malého genomu sekvence uloženy s GenBank (KT630293.1, U12801.1, a KT630290.1).

Přímé Sekvenování Keystone Virus v Moči

Jak tam jsou četné orthobunyaviruses, a publikoval RT-PCR primery pro sekvenování KEYV nebyly k dispozici, virus byl sekvenován pomocí účely-navrženy primery na základě 3 k dispozici, kompletní Keystone virus genomů v GenBank. Sekvenování bylo provedeno pomocí strategie chůze genomu, s PCR primery popsanými v doplňkové tabulce 1; naše kompletní metody jsou zahrnuty v doplňkových datech. Sekvence byla označena jako KEYV/Homo sapiens/Gainesville-1/2016; 3 genomu segmentu sekvence byla uložena v GenBank pod přístupovými čísly MH016784 (velká část), MH016785 (střední segment), a MH016786 (malou část). Kompletní L genom má 98 až 99% identitu s odpovídající genomy pouze 3 další kompletní Keystone virus Jsem k dispozici sekvence v Genbank (KT630288.1, KX817321. 1 a KT630291. 1). Podobně, kompletní M genom má 98 až 99% společného s odpovídající M sekvence (AF123489.1, KT630289.1, a KX817322.1) a 99% společného s odpovídající S genom sekvence (KT630293.1, U12801.1, a KT630290.1).

Izolace a Vizualizace Keystone Virus v Kultivované Buňky

Od Keystone virus vRNA byla zjištěna objektivní sekvenování (a později byl plně sekvenován), byly učiněny pokusy o izolaci viru v buněčné linii známo, na podporu svého růstu (Vero buňky) a mouse neuroblastomové buněčné linie Neuro-2A; popis úplných metod je uveden v doplňkových údajích. Virus indukované smíšené cytopatické účinky (CPE)byly patrné v buňkách Neuro-2A 2 dny po inokulaci buněk močí, ale ne slinami, a totéž bylo pozorováno o 1 den později v buňkách Vero E6. Na subkultury, CPE byly patrné 2 dny po očkování Vero E6 buněk s vyhořelým média z moči-naočkována Neuro-2A. Na KEYV-indukované CPE tvořil v Vero E6 buněk jsou zobrazeny v Doplňkové Údaje S1A a S1B; oba původní buňky Vero E6 Inokulované močí a Vero E6 Inokulované buňkami Neuro-2A infikovanými virem vytvořily stejný typ CPE. Supernatanty buněk infikovaných virem byly pozitivní na KEYV vRNA pomocí RT-PCR, zatímco ty z mock-inokulovaných kontrol byly negativní na KEYV vRNA.

prokázat aktivní Keystone replikaci viru, Vero E6 buněk zobrazující významné CPE (>70% z infikované buněčné monovrstvy) 40 hodin po infekci byly analyzovány pomocí transmisní elektronové mikroskopie a byly předvedeny k prokázání typické bunyavirus vyvolané CPE a produkce potomstva virionů. Metody a obrázky (doplňkové obrázky S2A-F–jsou zahrnuty v doplňkových údajích.

KOMENTÁŘE

KEYV, negativní-pocit, single-strand RNA virus, je obecně umístěny do toho, co bylo nazváno „California Séroskupiny“ rodu viry orthobunyavirus, který zahrnuje, mimo jiné, Kalifornie encefalitidy virus, Jamestown Canyon virus, a La Crosse encefalitidy virus. KEYV, na základě studií provedených v roce 1960 a 1970, se zdá být rozšířený v pobřežních oblastech na jihovýchodě Spojených Států, s izoláty identifikovány (v komára a živočišných vzorků) z Chesapeake Bay v Texasu. Organismus se zdá, že mají řadu obratlovců hostitelů, včetně, jak již bylo uvedeno, veverka šedá (30% séropozitivity ve studii v Pokomoke Cypress Bažiny v Marylandu ), mývalové (18% séropozitivních ve stejné studii), a whitetailed jelenů (10% séropozitivních v Marylandu studie; 2% séropozitivních ve studii v Texasu ); to se zdá být vzácný pták nebo plaz populace. Virus může být přenášen transovariálně u komárů, přičemž A. atlanticus se jeví jako primární vektor(ačkoli KEYV byl identifikován u jiných druhů Aedes a Culex). Obraz, který se objevuje, je virus endemický pro komáry a lesní obratlovce, i když má nejistý klinický význam v populacích zvířat.

je zde tedy otázka významu KEYV pro člověka. Studie séroprevalence provedené před 50 lety za použití virových neutralizačních testů naznačují, že séropozitivita u zdravých lidských populací byla v rozmezí 20% . Naše data prokázala, že lidské infekce se mohou (a stále vyskytují) vyskytovat, přičemž životaschopný virus je detekovatelný v moči. Zatímco my nemůžeme říci jednoznačně, že virus byl zodpovědný za vyrážku a hlášeny horečka, naše data jsou jasně sugestivní, a zvýšit možnost, že část z toho, co jsou jinak všední vyrážka a horečka případech vidět v primární péči v pobřežních oblastech na jihovýchodě Spojených Států, ve skutečnosti odrážejí KEYV infekcí. Mnoho virů v Kalifornské skupině bylo spojeno s encefalitidou a, jak je ukázáno v této zprávě, virus dobře roste v buněčných liniích neuroblastomu; v případech virové encefalitidy, u kterých není stanovena etiologie, může být také užitečné hledat infekce KEYV. V tomto případě, v nastavení obavy o ZIKV infekce, komplexní virologickou hodnocení vyústilo v izolaci viru; je velmi nepravděpodobné, že, mimo podobné výzkumné nastavení, to by někdy byly identifikovány. Naše zjištění podtrhují rozmanitost potenciálních arbovirových patogenů v této oblasti, a naznačují, že komplexní analýza možných virových patogenů by měla zahrnovat diagnostiku KEYV.

doplňující údaje

doplňkové materiály jsou k dispozici na Klinické infekční nemoci online. Zveřejněné materiály nejsou kopírovány a jsou výlučnou odpovědností autorů, proto by otázky či připomínky měly být adresovány příslušnému autorovi.

poznámky

finanční podpora. Tato práce byla podpořena interní financování z University of Florida Vznikajících Patogenů Ústav a Ministerstvo Životního prostředí a Globálního Zdraví, škola Veřejného Zdraví a Zdravotnických Profesí.

potenciální střet zájmů. Všichni autoři: žádné hlášené střety zájmů. Všichni autoři předložili formulář ICMJE pro zveřejnění možných střetů zájmů. Byly zveřejněny konflikty, které redakce považuje za relevantní pro obsah rukopisu.

Vazba
JO
Hammon
WM
Lewis
– AL
Sather
GE

,

Taylor
DJ

.

Kalifornská skupina arboviry na Floridě a zpráva o novém kmeni, viru Keystone

.

Public Health Rep
1966

;

81

:

607

13

.

LeDuc
PF
Burger
JC
Eldridge
BF
Russell
PK

.

ekologie viru Keystone, transovariálně udržovaný arbovirus

.

Ann N Y Acad Sci
1975

;

266

:

144 –

51

.

Sudia
WD
Newhouse
VF
Calisher
CH
Chamberlain
RW

.

kalifornské skupiny arboviry: izolace od komárů v Severní Americe

.

Mosquito News
1971

;

31

:

576

600

.

Issel
CJ
Hoff
GL
Školitel

.

sérologický důkaz infekce jelena běloocasého v Texasu třemi kalifornskými arboviry (Jamestown Canyon, San Angelo a Keystone)

.

J Wildl Dis
1973

;

9

:

245

8

.

W
DM
LeDuc
PF
Bailey
CL
Dalrymple
JM

,

Gargan
TP

II.

Sérologické důkazy z Jamestown Canyon a Keystone virus infekce do obratlovce DelMarVa Poloostrov

.

Am J Trop Med Hyg
1982

;

31

:

1245

51

.

W
DM
Bailey
CL
Roberts
NT
Tammariello
RF

,

Dalrymple
JM
Clark
GC

.

udržování a přenos viru Keystone Aedes atlanticus (Diptera: Culicidae) a veverka Šedá v bažině Pocomoke Cypress, Maryland

.

J Med Entomol
1988

;

25

:

493

500

.

D
Hammon
WM
Sather
GE

.

přehled současné epidemiologické literatury o virech Kalifornské arbovirové skupiny

.

Am J Trop Med Hyg
1972

;

21

:

964 –

78

.

Lednicky
J
Beau de Rochars
PP
ElBadry
M

, et al.

vypuknutí viru Zika na Haiti v roce 2014: molekulární a klinická data

.

PLoS Negl Trop Dis
2016

;

10

:

e0004687

.

de Morais Bronzoni
RV
Baleotti
FG
Ribeiro Nogueira
RM
Nunes
M

,

Moraes Figueiredo
LT

.

duplexní reverzní transkripce-PCR následovaná vnořenými PCR testy pro detekci a identifikaci brazilských alfavirů a flavivirů

.

J Blink Microbiol
2005

;

43

:

696

702

.

© autoři 2018. Publikoval Oxford University Press pro infekční nemoci Society of America. Všechna práva vyhrazena. Pro oprávnění, e-mail: [email protected]
Tento článek je publikován a distribuován pod podmínkami Oxford University Press, Standardní Časopisech Publikace Modelu (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.