キーストーンウイルスは、発疹と主観的な発熱を持つフロリダのティーンエイジャーから分離:米国南東部の別の風土病アルボウイルス?

Abstract

キーストーンウイルスは、カリフォルニア州の血清群オルトブニアウイルスであり、1964年にフロリダ州キーストーンの蚊から最初に単離された。 この地域に住んでいる人の〜20%が血清陽性であることを示唆する研究にもかかわらず、ヒトからの孤立の以前の報告はなかった。 我々は、発疹や発熱とフロリダのティーンエイジャーからのウイルス分離を報告します。

Zikaウイルス(ZIKV)の出現とChikungunyaウイルスとデング熱ウイルス感染の継続的な同定は、米国におけるarbovirusの固有性と広がりについての懸念を高めています。 キーストーン-ウイルス(KEYV; orthobunyavirus属(orthobunyavirus属、peribunyaviridae)は、orthobunyavirus California血清群のメンバーであり、1964年にフロリダ州キーストーン(Tampa Bay近く)の蚊から最初に単離された。 その後の研究では、蚊、特にaedes atlanticus、リス、アライグマ、ホワイトテイルジカ、チェサピーク湾からフロリダ州を通って南に伸びている沿岸地域、およびテキサス州まで西に広がるウイルスの広範な分布が示された。

1960年代にヒト集団で実施された研究では、血清陽性率は19-21%の範囲であった。 しかし、ヒトからのKEYVの実際の単離はこれまでに報告されたことがなく、またKEYVは、動物および蚊におけるその明らかな固有性にもかかわらず、ヒトの臨床的症候群と関連していませんでした。

ケースレポート

16歳の以前に健康な男性は、低悪性度の発熱とびまん性皮膚発疹の歴史を持つ北中部フロリダの緊急ケアクリニックに、2016年 患者は前の晩に「暖かい」と感じ、両親によって推定された温度は〜100°Fの範囲にあると報告した。 提示の朝に紅斑性丘疹が出現し,胸部から始まり,腹部,腕,背中および顔面に徐々に広がった。 小胞はなく,発疹は無痛で非そう痒性であった。 それは熱と日光によって悪化した。 患者は悪寒、頭痛、首のこわばり、または胃腸症状を否定した。 彼は軽度の疲労と足首の不快感に注意しました,彼はマーチングバンドの参加者のためのサマーキャンプに同時出席に起因します,新しいバンドの靴を着て. 前の週、患者は扁桃炎の可能性があると診断され、500mgでアモキシシリンによる治療に置かれていた経口3回、彼は次の日に自己中止していた。 彼に関連した過去の医学か外科歴史がなかった;知られていたimmunosuppressiveか生来の条件;知られていたアレルギー;中央フロリダの外の最近の旅行;および農場 彼はすべての推奨された小児予防接種を受けていた。 他の家族は病気ではなかった。 患者と彼の家族は、報告された病気の4年前にカンザス州(キーストーンウイルスが同定されていない場所)からフロリダに移動していた。 彼が出席していたバンドキャンプは夕方まで続き、彼はジエチルトルアミド(一般的にDEETとして知られている)の適用にもかかわらず、蚊に何度も噛まれていると報告した。

診療所での検査では、温度は98.5°F(36.9°C)、脈拍は69拍/分、呼吸数は12呼吸/分、血圧は122/82mm/Hgでした。 体幹、腕、および顔のびまん性、紅斑性、丘疹性発疹が認められた(図1)。 患者の頭部,頚部,呼吸器,心臓血管,腹部検査は正常であった。 診療所で行われた迅速なモノスポットテストは陰性であった。 患者とその両親の同意を得て、唾液と尿サンプルを採取した。 発疹は2日後に解決し、それ以上の発熱はなかった。 彼はその後、発疹の出現なしにアモキシシリンを服用しています。

図1.

16歳の症例患者で発疹が観察された。

図1を参照してください。

16歳の症例患者で発疹が観察された。

ウイルス同定/単離

逆転写ポリメラーゼ連鎖反応スクリーン

フロリダ州でZIKVの流行が発生していた期間に発疹や発熱の病歴を提示した患者として、唾液および尿サンプルを試験し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)によってZIKV、チクングニアウイルス、およびデングウイルス血清型1-4ゲノムリボ核酸(RNA)に対して陰性であった。 ブラジルのアルファウイルスとフラビウイルスを検出するユニバーサルプライマーを用いてRT-PCRを行うことにより,アルファウイルスまたはフラビウイルス病因の可能性をさらに評価した。 唾液および尿サンプルの両方は、アルファウイルスおよびフラビウイルスvRNAについて陰性を試験したが、陽性対照は予想通りに機能した(データは示さ

公平な逆転写ポリメラーゼ連鎖反応と推定ウイルス病因物質の同定のためのシーケンス

推定ウイルスアイデンティティは、我々は以前に概説した ; 詳細な方法は、この論文に付随する補足データで提供されています。 ウイルスゲノムRNA(および/またはデオキシリボ核酸)を、Qiaamp Viral RNA Mini Kit(Qiagen Inc.). PCRアンプリコンを精製し(Qiagen Qiaquick PCR purification kit)、Taq DNA polymerase(New England Biolabs)で尾を付けた。 その後、a尾PCRアンプリコンをT aクローニングし、挿入物をSanger配列決定を用いて配列決定した。 TAクローンインサート(尿から20インサート、唾液から20)と40プラスミドの合計のうち、尿から1はGenBank(KT630293.1、U12801.1、およびKT630290.1)に堆積したキーストーンウイルス小ゲノムシーケンス(KT630293.1、U12801.1、およびKt630290.1)の99%の同一性を持つ166bpインサートが含まれていた。

尿中のキーストーンウイルスの直接配列決定

多数のオルトブニャウイルスがあり、keyvを配列決定するための公開されたRT-PCRプライマーが利用できなかったため、genbankで利用可能な3つの完全なキーストーンウイルスゲノムに基づいて目的に設計されたプライマーを用いてウイルスを配列決定した。 配列決定は、補足表1に記載されているPCRプライマーで、ゲノム歩行戦略を使用して達成された;私たちの完全な方法は、補足データに含まれています。 配列は、KEYV/Homo sapiens/Gainesville−1/2 0 1 6と命名され、3つのゲノムセグメント配列は、受託番号M H0 1 6 7 8 4(大部分)、m H0 1 6 7 8 5(中部分)、およびM H0 1 6 7 8 6(小部分)でGenbankに寄託されている。 完全なLゲノム配列は、Genbankで利用可能な唯一の3つの他の完全なキーストーンウイルスL配列の対応するゲノムと98-99%の同一性を有する(KT630288.およびKT6 3 0 2 9 1. 同様に、完全なMゲノムは、対応するM配列(AF123489.1、KT630289.1、およびKX817322.1)と98〜99%の共通性を有し、対応するSゲノム配列(KT630293.1、U12801.1、およびKT630290.1)と99%の共通性を有する。

培養細胞におけるキーストーンウイルスの単離と可視化

キーストーンウイルスvRNAは、不偏配列によって検出された(後に完全に配列決定された)ので、その増殖を支持することが知られている細胞株(Vero細胞)およびマウス神経芽細胞腫細胞株Neuro-2Aにおいてウイルスを単離する試みが行われた。; 補足データには、完全なメソッドの説明が記載されています。 ウイルス誘発性混合細胞変性効果(CPE)は、尿と細胞の2日後の接種によって神経-2A細胞で明らかであったが、唾液ではなく、同じことが1日後にVero E6細胞 継代培養時に、CPEは、尿接種された神経-2Aからの使用済み培地でVero E6細胞の接種2日後に明らかであった。VERO E6細胞で形成されたKEYV誘導CPEは、補; ウイルスに感染した神経-2A細胞を接種した元の尿接種Vero E6およびVero E6細胞は、同じタイプのCPEを形成した。 ウイルス感染細胞の上清はRT-PCRによりKEYVVRNAに対して陽性であったが,模擬接種対照からのものはkeyvvrnaに対して陰性であった。

アクティブなキーストーンウイルス複製を実証するために、有意なCPEを表示するVero E6細胞(>感染細胞単層の70%)40時間感染後に透過型電 補足データには、方法および画像(補足図S2A〜F)が含まれる。

コメント

KEYVは、ネガセンス一本鎖RNAウイルスであり、一般にオルソブニャウイルス属の”カリフォルニア血清群”と呼ばれているものに配置されており、カリフォルニア脳炎ウイルス、ジェームズタウン-キャニオン-ウイルス、ラクロス脳炎ウイルスなどが含まれる。 KEYVは、1960年代と1970年代に行われた研究に基づいて、チェサピーク湾からテキサス州に(蚊や動物のサンプルで)同定された分離株で、米国南東部の沿岸地域に広まっているようである。 この生物は、前述のように、灰色のリス(メリーランド州のPokomoke Cypress Swampの研究では30%の血清陽性)、アライグマ(同じ研究では18%の血清陽性)、白鹿(メリーランド州の研究では10%の血清陽性、テキサス州の研究では2%の血清陽性)を含む脊椎動物の宿主を持っているようであり、鳥や爬虫類の個体群ではまれであるようである。 このウイルスは蚊の中で経腹的に伝染することがあり、a.atlanticusは主要なベクターであるように見える(ただし、KEYVは他のAedesおよびCulex種で同定されている)。 現われる映像は動物の人口の不確かな臨床重大さのにもかかわらずカおよび森林脊椎動物に風土病ウイルスのそれ、である。そして、KEYVと人間との関連性の問題があります。

ウイルスの中和の試金を使用して前に50年を行なったSeroprevalenceの調査は健康な人間の人口のseropositivityが20%の範囲にあったことを提案しました。 私たちのデータは、人間の感染が起こり、尿中に生存可能なウイルスが検出されることを実証しました。 私たちは、ウイルスが発疹や報告された熱の原因であったことを確実に言うことはできませんが、私たちのデータは明らかに示唆しており、米国南東部の沿岸地域のプライマリケアの設定で見られるそうでなければ目立たない発疹や発熱の症例の割合が実際にKEYV感染を反映している可能性を高めています。 カリフォルニアのグループのウイルスの多数は脳炎とリンクされ、このレポートで示されるように、ウイルスはneuroblastomaの細胞ラインでよく育ちます; 病因が決定されていないウイルス性脳炎の症例では、KEYV感染を探すことも価値があるかもしれません。 現在のケースでは、ZIKV感染に関する懸念の設定では、包括的なウイルス学的評価は、ウイルスの単離をもたらした;それは非常に低い、同様の研究設定の外に、それが今までに同定されているであろうことです。 我々の調査結果は、この地域の潜在的なarboviral病原体の多様性を強調し、可能なウイルス病原体の包括的な分析は、KEYVの診断を含める必要があることを示唆

補足データ

補足資料は、臨床感染症オンラインで入手できます。 読者の利益のために著者によって提供されたデータで構成され、投稿された資料はコピーされず、著者の単独の責任であるため、質問やコメントは対応する著者に対処する必要があります。

注意事項

財政的支援。 この作業は、フロリダ大学Emerging Pathogens Instituteと環境-グローバルヘルス学科、公衆衛生-保健専門学校からの内部資金によって支援されました。

利益相反の可能性があります。 すべての著者:利益相反は報告されていません。 すべての著者は、潜在的な利益相反の開示のためにICMJEフォームを提出しています。 編集者が原稿の内容に関連すると考える競合が開示されています。

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