Keystone Virus eristetty Florida Teini ihottuma ja Subjektiivinen kuume: toinen endeeminen Arbovirus Kaakkois Yhdysvalloissa?

Abstrakti

Keystone-virus, kalifornialaiseen seroryhmään kuuluva ortobunyavirus, eristettiin ensimmäisen kerran vuonna 1964 hyttysistä Keystonessa, Floridassa. Aiemmin ei ole raportoitu eristäytymisestä ihmisistä, vaikka tutkimukset viittaavat siihen, että ~20% alueen asukkaista on seropositiivisia. Raportoimme viruksen eristämisestä floridalaiselta teiniltä, jolla on ihottumaa ja kuumetta.

zikaviruksen (ZIKV) ilmaantuminen ja chikungunya-viruksen ja Denguevirustartuntojen jatkuva tunnistaminen ovat herättäneet kasvavaa huolta arbovirusten endeemisyydestä ja leviämisestä Yhdysvalloissa. Keystonivirus (täsmennyssivu; heimo Orthobunyavirus, heimo Peribunyaviridae), joka kuuluu orthobunyaviruksen Kalifornian seroryhmään, eristettiin ensimmäisen kerran hyttysistä Keystonessa Floridassa (lähellä Tampa Bayta) vuonna 1964 . Myöhemmät tutkimukset osoittivat viruksen levinneen laajalti hyttysissä, erityisesti Aedes atlanticuksessa, sekä Oravissa, pesukarhuissa ja valkohäntäpeuroissa, rannikkoalueilla, jotka ulottuivat chesapeakenlahdelta etelään Floridan kautta, ja niinkin pitkälle länteen kuin Texasiin .

ihmispopulaatioilla 1960-luvulla tehdyissä tutkimuksissa seropositiivisuus oli 19-21 prosentin luokkaa . Keyvin tosiasiallista eristämistä ihmisistä ei kuitenkaan ole koskaan aiemmin raportoitu, eikä siihen ole liittynyt kliinistä oireyhtymää ihmisillä, vaikka se on ilmeisen endeeminen eläimillä ja hyttysillä.

TAPAUSRAPORTTI

16-vuotias aiemmin terve mies tuotiin elokuussa 2016 kiireellisen hoidon klinikalle Pohjois-Keski-Floridaan, jolla oli matala-asteinen kuume ja hajanainen ihottuma. Potilas kertoi tuntevansa itsensä edellisenä iltana” lämpimäksi”, ja hänen vanhempiensa arvioima lämpötila oli noin 100°F. Punoittava papulaarinen ihottuma ilmestyi esittelyaamuna, alkaen hänen rinnastaan ja vähitellen leviää hänen vatsaan, käsivarteen, selkään ja kasvoihin. Rakkuloita ei ollut, ja ihottuma oli kivuton ja ei-kutiseva. Kuumuus ja auringonvalo pahensivat sitä. Potilas kiisti vilunväristykset, päänsäryn, niskan jäykkyyden tai maha-suolikanavan oireet. Hän ei huomata lievä väsymys ja nilkka epämukavuutta, jonka hän johtuvan samanaikaisesta läsnäolo kesäleirillä marssivat bändi osallistujia, yllään uusi bändi kengät. Edellisellä viikolla potilaalla oli diagnosoitu mahdollinen tonsilliitti ja hänet oli sijoitettu amoksisilliinihoitoon 500 mg: lla suun kautta 3 kertaa päivässä, jonka hän oli itse lopettanut seuraavana päivänä. Hänellä ei ollut asiaankuuluvaa aikaisempaa lääketieteellistä tai kirurgista historiaa; Ei tunnettuja immunosuppressiivisia tai synnynnäisiä sairauksia; Ei tunnettuja allergioita; ei viimeaikaisia matkoja Keski-Floridan ulkopuolelle; eikä altistumista maatiloille tai tuotantoeläimille. Hän oli saanut kaikki lapsuuden suositellut rokotukset. Muut perheenjäsenet eivät sairastuneet. Potilas oli perheineen muuttanut Floridaan Kansasista (jossa Keystone-virusta ei ole tunnistettu) 4 vuotta ennen ilmoitettua sairautta. Bändileiri, johon hän osallistui, jatkui iltaan asti, ja hän kertoi joutuneensa hyttysten puremaksi lukuisia kertoja dietyylitoluamidin (yleisesti DEET) levittämisestä huolimatta.

klinikan tutkimuksissa hänen lämpötilansa oli 98,5°F (36,9°C), pulssi 69 lyöntiä/minuutti, hengitystiheys 12 hengitystä/minuutti ja verenpaine 122/82 mm / Hg. Rungon, käsivarren ja kasvojen diffuusi, punoittava, papulaarinen ihottuma havaittiin (Kuva 1). Potilaan pään, kaulan, hengitys -, sydän-ja vatsatutkimukset olivat normaalit. Klinikalla tehty pika-Monospot-testi oli negatiivinen. Potilaan ja hänen vanhempiensa suostumuksella otettiin sylki-ja virtsanäytteet. Ihottuma hävisi 2 päivää myöhemmin, eikä kuumetta enää ollut. Myöhemmin hän on ottanut amoksisilliini ilman ulkonäkö ihottuma.

Kuva 1.

16-vuotiaalla tapauspotilaalla havaittu ihottuma.

Kuva 1.

16-vuotiaalla tapauspotilaalla havaittu ihottuma.

viruksen tunnistaminen/eristäminen

Käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktioseulot

koska potilaalla oli ollut ihottumaa ja kuumetta Zikv-taudin puhkeamisen aikana Floridassa, syljestä ja virtsasta otetut näytteet olivat negatiivisia zikv-viruksen, Chikungunya-viruksen ja dengueviruksen serotyypin 1-4 genomisen ribonukleiinihapon (RNA) osalta käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktiolla (RT-PCR) . Alfaviruksen tai flaviviruksen etiologian mahdollisuutta arvioitiin edelleen suorittamalla RT-PCR-testi käyttäen yleisiä alukkeita, jotka havaitsevat alfavirukset ja flavivirukset Brasiliassa . Sekä sylki-että virtsanäytteistä löytyi negatiivisia alfavirus-ja flavivirus vRNAs-viruksia, kun taas positiiviset kontrollit toimivat odotetusti (tietoja ei näy).

puolueeton käänteistranskriptio polymeraasiketjureaktio ja sekvensointi oletetun Virusetologisen aineen tunnistamiseksi

oletettu viruksen identiteetti saatiin aiemmin kuvaamamme menettelyn muuttamisen jälkeen ; yksityiskohtaiset menetelmät esitetään tämän asiakirjan liitteenä olevissa lisätiedoissa. Viruksen genomi-RNA (ja / tai deoksiribonukleiinihappo ) uutettiin virioneista QIAamp-viruksen RNA-Minipakkauksella (Qiagen Inc.). PCR amplikonit puhdistettiin (Qiagen QIAquick PCR purification kit) ja A-tailed Taq DNA polymeraasilla (New England Biolabs). A-tailed PCR amplikonit sitten TA-kloonattiin, ja insertit sekvensoitiin käyttäen Sanger sekvensointia. Kaikkiaan 40 plasmidista, joissa oli TA-kloonattuja inserttejä (20 inserttiä virtsasta, 20 syljestä), 1 virtsasta sisälsi 166-bp insertin, jossa 99% identiteetistä oli Keystone-viruksen pienen genomin sekvenssejä, jotka talletettiin Genbankiin (KT630293.1, U12801.1 ja KT630290.1).

Keystone-viruksen suora sekvensointi virtsaan

koska ortobunyaviruksia on lukuisia, eikä julkaistuja RT-PCR-alukkeita keyv: n sekvensoimiseksi ollut saatavilla, virus sekvensoitiin tarkoitukseen suunnitelluilla alukkeilla, jotka perustuivat Genbankissa saatavilla oleviin 3: een täydelliseen Keystone-viruksen genomiin. Sekvensointi toteutettiin genomikävelystrategialla, jossa PCR-alukkeet on kuvattu täydentävässä taulukossa 1; Täydelliset menetelmämme sisältyvät lisätietoihin. Sekvenssi nimettiin keyv / Homo sapiens / Gainesville-1/2016; 3 genome segmentin sekvenssit on talletettu GenBank liittymisnumeroilla MH016784 (suuri segmentti), MH016785 (keskisegmentti), ja MH016786 (pieni segmentti). Täydellinen l genomi sekvenssi on 98-99% identiteetit vastaavat genomit vain 3 muuta täydellistä Keystone virus l sekvenssejä saatavilla Genbank (KT630288.1, KX817321.1 ja KT630291.1). Vastaavasti koko M-genomilla on 98-99% yhteistä vastaavien M-sekvenssien (AF123489.1, KT630289.1 ja KX817322.1) kanssa ja 99% yhteistä vastaavien S-genomisekvenssien (KT630293.1, U12801.1 ja KT630290.1) kanssa.

Keystone-viruksen eristäminen ja visualisointi viljellyissä soluissa

koska Keystone-virus vRNA havaittiin puolueettoman sekvensoinnin avulla (ja myöhemmin täysin sekvensoitiin), virusta yritettiin eristää solulinjassa, jonka tiedetään tukevan sen kasvua (Vero-solut) ja hiiren neuroblastoomasolulinjassa Neuro-2a; täydentävissä tiedoissa on kuvaus kaikista menetelmistä. Viruksen aiheuttamat sekamuotoiset sytopaattiset vaikutukset (CPE) olivat havaittavissa Neuro-2a-soluissa 2 päivää sen jälkeen, kun solut oli inokuloitu virtsalla, mutta ei syljellä, ja sama havaittiin 1 päivä myöhemmin Vero E6-soluissa. Subviljelyn yhteydessä CPE oli havaittavissa 2 päivää vero E6-solujen inokuloinnin jälkeen virtsaan inokuloidun Neuro-2a: n käytetyillä väliaineilla. Avainv: n indusoima CPE muodostuu Vero E6: n soluissa on esitetty Lisäkuvioissa S1A ja S1B; sekä alkuperäiset virtsaan inokuloidut Vero E6-että Vero E6-solut, jotka on inokuloitu viruksen infektoimilla Neuro-2a-soluilla, muodostivat samantyyppisen CPE: n. Viruksen infektoimien solujen supernatantit olivat RT-PCR-menetelmällä positiivisia KEYV vRNA: lle, kun taas inokuloiduilla mallikontrolleilla saadut supernatantit olivat negatiivisia KEYV vRNA: lle.

aktiivisen Keystoniviruksen replikaation osoittamiseksi Vero E6-solut, joilla oli merkittävä CPE (>70% tartunnan saaneista solumonolikerroksista) 40 tuntia tartunnan jälkeen, analysoitiin transmissioelektronimikroskopialla, ja niiden osoitettiin osoittavan tyypillistä bunyaviruksen aiheuttamaa CPE: tä ja jälkeläisvirusten tuotantoa. Lisäaineistoon sisältyvät menetelmät ja kuvat (Lisäluvut S2A–F).

kommentti

keyv, negatiivinen-sense yksijuosteinen RNA-virus, sijoitetaan yleensä Ortobunyaviruksen suvun niin sanottuun ”Kalifornian Seroryhmään”, johon kuuluvat muun muassa Kalifornian enkefaliittivirus, Jamestownin Kanjonivirus ja La Crosse-enkefaliittivirus. 1960-ja 1970-luvuilla tehtyjen tutkimusten perusteella KEYV vaikuttaa levinneen laajalle Kaakkois-Yhdysvaltain rannikkoalueilla, ja isolaatteja on tunnistettu (hyttys-ja eläinnäytteissä) Chesapeakenlahdelta Texasiin. Organismi näyttää olevan useita selkärankaisten isäntiä, mukaan lukien, kuten aiemmin todettiin, harmaa orava (30% seropositivity tutkimuksessa Pokomoke Cypress Swamp Marylandissa), pesukarhut (18% seropositiivinen samassa tutkimuksessa), ja whitetailed peura (10% seropositiivinen Maryland tutkimuksessa; 2% seropositiivinen tutkimuksessa Texas ); se näyttää olevan harvinainen lintu tai matelija populaatioita. Virus voi tarttua transovariaalisesti hyttysissä, ja A. atlanticus näyttää olevan ensisijainen vektori (vaikka KEYV on tunnistettu muilla Aedes-ja Culex-lajeilla ). Tuloksena on virus, joka on endeeminen hyttysille ja metsän selkärankaisille, vaikka sen kliininen merkitys eläinpopulaatioissa on epävarma.

on siis kysymys KEYV: n merkityksestä ihmisille. Seroprevalenssitutkimukset, jotka tehtiin 50 vuotta sitten käyttäen virusten neutralisaatiokokeita, viittasivat siihen, että seropositiivisuus terveillä ihmispopulaatioilla oli 20 prosentin luokkaa . Aineistomme osoitti, että ihmisen infektioita voi (ja on edelleen) esiintyä, ja elinkelpoinen virus voidaan havaita virtsasta. Vaikka emme voi sanoa varmasti, että virus oli vastuussa ihottumasta ja raportoitu kuume, meidän tiedot ovat selvästi vihjailevia, ja nostaa mahdollisuus, että osa mitä muuten unremarkable ihottuma ja kuume tapauksia nähnyt perusterveydenhuollon asetukset rannikkoalueilla Kaakkois-Yhdysvalloissa todella heijastavat KEYV infektioita. Monet Kalifornian ryhmän viruksista on yhdistetty aivotulehdukseen, ja kuten tämä raportti osoittaa, virus kasvaa hyvin neuroblastooman solulinjoissa; virusaivotulehdustapauksissa, joissa etiologiaa ei ole määritetty, voi myös olla syytä etsiä KEYV-infektioita. Tässä tapauksessa, kun on kyse ZIKV-tartunnasta, kattava virologinen arviointi johti viruksen eristämiseen; on erittäin epätodennäköistä, että virusta olisi koskaan tunnistettu samankaltaisen tutkimusympäristön ulkopuolella. Havaintomme korostavat mahdollisten arboviruspatogeenien monimuotoisuutta tällä alueella ja viittaavat siihen, että mahdollisten viruspatogeenien kattavaan analyysiin olisi sisällyttävä keyv: n diagnostiikka.

lisätiedot

Lisäaineistot ovat saatavilla Clinical Infectious Diseases netistä. Koostuen kirjoittajien lukijaa hyödyttävistä tiedoista, lähetettyjä aineistoja ei kopioida ja ne ovat yksin kirjoittajien vastuulla, joten kysymykset tai kommentit on osoitettava vastaavalle kirjoittajalle.

huomautukset

rahoitustuki. Tätä työtä tukivat Floridan yliopiston Emerging Pathogens Institute ja Department of Environmental and Global Health, College of Public Health and Health Professions.

mahdolliset eturistiriidat. Kaikki tekijät: ei raportoitu eturistiriitoja. Kaikki kirjoittajat ovat toimittaneet ICMJE-lomakkeen mahdollisten eturistiriitojen ilmoittamista varten. Ristiriidat, joita toimittajat pitävät olennaisina käsikirjoituksen sisällön kannalta, on paljastettu.

Bond
JO

,

Hammon
WM

,

Lewis
AL

,

Sather

GE

,

Taylor
DJ

.

Kalifornialainen ryhmä arboviruksia Floridassa ja raportoi uudesta kannasta, Keystone-viruksesta

.

kansanterveyden edustaja
1966

;

81

:

607

13

.

LeDuc
JW

,

Burger
JF

,

Eldridge
BF

,

Russell
PK

.

Keystone-viruksen ekologia, transvaraisesti ylläpidetty arbovirus

.

Ann N y Acad Sci
1975

;

266

:

144

51

.

Sudia
WD

,

Newhouse
VF

,

Calisher
CH

,

Chamberlain
RW

.

Kalifornialaisryhmä arbovirukset: isolations from hyttyset in North America

.

Mosquito News
1971

;

31

:

576

600

.

Issel
CJ

,

Hoff
GL

,

Trainer
BACK

.

serologisia todisteita valkohäntäpeurojen tartunnasta Texasissa kolmella Kalifornialaisryhmään kuuluvalla arboviruksella (Jamestown Canyon, San Angelo ja Keystone)

.

J Wildl Dis
1973

;

9

:

245

8

.

Watts

DM

,

LeDuc
JW

,

Bailey
cl

,

Dalrymple
jm

,

Gargan
TP

II.

serologisia todisteita Jamestownin kanjonista ja Keystone-virustartunnasta Delmarvan niemimaan selkärankaisissa

.

Am J Trop Med Hyg
1982

;

31

:

1245

51

.

Watts

DM

,

Bailey
cl

,

Roberts

nt

,

Tammariello
RF

,

Dalrymple
jm

,

Clark
GC

.

Aedes atlanticus (Diptera: Culicidae) ja harmaaorava ylläpitävät ja levittävät Keystone-virusta Pocomoken Sypressisuolla Marylandissa

.

J Med Entomol
1988

;

25

:

493

500

.

Parkin
we

,

Hammon
WM

,

Sather
GE

.

Review of current epidemiological literature on viruses of the California arbovirus group

.

Am J Trop Med Hyg
1972

;

21

:

964

78

.

Lednicky
J

,

Beau de Rochars
VM

,

ElBadry
m

, et al.

Zikavirusepidemia Haitissa vuonna 2014: molekulaariset ja kliiniset tiedot

.

PLoS Negl Trop Dis
2016

;

10

:

e0004687

.

de Morais Bronzoni
RV

,

Baleotti
FG

,

Ribeiro Nogueira
RM

,

Nunes
m

,

Moraes Figueiredo
lt

.

Duplex reverse transkriptio-PCR, jota seuraa sisäkkäiset PCR-määritykset Brasilian alfavirusten ja flavivirusten

havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi.

J Blink Microbiol
2005

;

43

:

696

702

.

© the Author(s) 2018. Julkaisija Oxford University Press for the Infectious Diseases Society of America. Kaikki oikeudet pidätetään. Käyttöoikeuksia varten Sähköposti: [email protected]
tämä artikkeli on julkaistu ja jaettu Oxford University Press, Standard Journals Publication Model (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.