Keystone Virus Isolated From a Florida Teenager With Rash and Subjective Fever: Another Endemic Arbovirus in the Southeastern United States?

Abstract

Keystone virus, a California-serogroup orthobunyavirus, was first isolated in 1964 from mosquitos in Keystone, Florida. Não houve relatos anteriores de isolamento de seres humanos, apesar de estudos sugerindo que ~20% das pessoas que vivem na região são seropositivos. Reportamos isolamento de vírus de um adolescente da Florida com uma erupção cutânea e febre.o aparecimento do vírus Zika( ZIKV) e a identificação contínua do vírus Chikungunya e infecções do vírus Dengue têm gerado preocupações crescentes sobre a endemicidade e a propagação de arbovírus nos Estados Unidos. Keystone virus (KEYV; genus Orthobunyavirus, família Peribunyaviridae), um membro do serogrupo de Orthobunyavirus California, foi isolado pela primeira vez de mosquitos em Keystone, Flórida (perto de Tampa Bay), em 1964 . Estudos subsequentes demonstraram uma distribuição generalizada do vírus nos mosquitos, particularmente em Aedes atlanticus, bem como em esquilos, guaxinins e veados de cauda branca, em regiões costeiras que se estendem desde a Baía de Chesapeake até a Flórida, e até o oeste do Texas .

em estudos realizados em populações humanas na década de 1960, as taxas de seropositividade situaram-se no intervalo de 19-21% . No entanto, o isolamento real de KEYV a partir de seres humanos nunca foi relatado antes, nem KEYV foi associado com uma síndrome clínica em seres humanos, apesar de sua endemicidade aparente em animais e mosquitos.

CASE REPORT

a 16-year-old previously-healthy male presented in August, 2016, to an urgent care clinic in north-central Florida with a history of low-grade fever and a diffuse skin rash. O paciente relatou sentir-se” quente ” na noite anterior, com uma temperatura estimada por seus pais para estar no intervalo de ~100°F. Uma erupção papular eritematosa apareceu na manhã da apresentação, começando em seu peito e progressivamente se espalhando para seu abdômen, braço, costas e face. Não havia vesículas, e a erupção era indolor e não prurítica. Foi agravado pelo calor e pela luz solar. O paciente negou arrepios, dor de cabeça, rigidez do pescoço ou sintomas gastrointestinais. Ele notou um ligeiro cansaço e desconforto no tornozelo, o que ele atribuiu à participação simultânea em um acampamento de verão para os participantes da banda, vestindo sapatos novos da banda. Na semana anterior, o doente tinha sido diagnosticado com possível amigdalite e tinha sido submetido a um tratamento com amoxicilina a 500 mg administrados por via oral 3 vezes ao dia, o qual tinha auto-descontinuado no dia seguinte. Não tinha antecedentes médicos ou cirúrgicos anteriores, não tinha condições imunossupressoras ou congénitas conhecidas, não tinha alergias conhecidas, não tinha viagens recentes fora da Florida central e não tinha exposição a explorações agrícolas ou animais de criação. Ele tinha recebido todas as imunizações de infância recomendadas. Nenhum outro membro da família estava doente. O paciente e sua família tinham se mudado para a Flórida de Kansas (onde o vírus Keystone não foi identificado) 4 anos antes da doença relatada. O acampamento da banda que ele estava assistindo continuou até a noite, e ele relatou ter sido mordido inúmeras vezes por mosquitos, apesar da aplicação de dietiltoluamida (comumente conhecido como DEET).

Em exame na clínica, ele tinha uma temperatura de 98,5°F (36.9°C), pulso de 69 batimentos/minuto, freqüência respiratória de 12 respirações/minuto e pressão arterial de 122/82 mm/Hg. Observou-se uma erupção cutânea difusa, eritematosa, papular do tronco, braço e face (Figura 1). Os exames da cabeça, pescoço, respiratório, cardiovascular e abdominal estavam normais. Um teste rápido de Monospotografia realizado na clínica foi negativo. Com o consentimento do paciente e de seus pais, amostras de saliva e urina foram coletadas. A erupção cutânea resolveu-se 2 dias depois, sem mais febre. Subsequentemente, tomou amoxicilina sem aparecimento de erupção cutânea.

Figura 1.erupção cutânea observada com um doente com 16 anos de idade.

Figura 1.erupção cutânea observada com um doente com 16 anos de idade.

identificação/isolamento VIRAL

telas de reacção de polimerase em cadeia de transcrição reversa

o doente apresentou antecedentes de erupção cutânea e febre durante um período em que ocorreu um surto de ZIKV na Florida, foram testadas amostras de saliva e urina que deram resultados negativos para o ZIKV, o vírus Chikungunya e o serotipo 1-4 do ácido ribonucleico genómico (ARN) por reacção de polimerase em cadeia de transcrição reversa (RT-PCR) . A possibilidade de etiologia de alfavírus ou flavivírus foi ainda avaliada através da realização de RT-PCR usando primers universais que detectam alfavírus e flavivírus no Brasil . Tanto as amostras de saliva como de urina apresentaram resultados negativos para o alphavírus e o flavivírus vRNAs, enquanto os controlos positivos funcionaram como esperado (os dados não foram apresentados).

transcrição reversa não distorcida reacção em cadeia da polimerase e sequenciação para identificação do agente etiológico putativo Viral

foi obtida uma identidade presumível do vírus após uma modificação de um procedimento que traçámos anteriormente. ; os dados complementares que acompanham o presente documento contêm métodos pormenorizados. O ARN genómico Viral (e / ou ácido desoxirribonucleico) foi extraído de viriões utilizando um Mini Kit de ARN Viral QIAamp (Qiagen Inc.). Amplicons PCR foram purificados (kit de purificação QIAGEN QIAquick PCR), e de cauda a com Taq DNA polimerase (Biolabs de Nova Inglaterra). Os amplificadores de PCR de cauda A foram então clonados, e as inserções sequenciadas usando sequenciamento de Sanger. De um total de 40 plasmídeos com inserções clonadas TA (20 inserções da urina, 20 da saliva), 1 da urina continha uma inserção de 166-bp com uma identidade de 99% de sequências de pequeno genoma do vírus Keystone depositadas com o GenBank (KT630293.1, U12801.1, e KT630290.1).

sequenciação directa do vírus Keystone na urina

Uma vez que existem numerosos ortobunyavírus, e não estavam disponíveis primers de RT-PCR publicados para sequenciação do KEYV, o vírus foi sequenciado utilizando primers concebidos para o efeito, com base em 3 genomas do vírus Keystone disponíveis e completos no GenBank. A sequenciação foi realizada usando uma estratégia de marcha do genoma, com os iniciadores PCR descritos na tabela Complementar 1; nossos Métodos completos são incluídos nos dados suplementares. A sequência foi designada como KEYV / Homo sapiens / Gainesville-1/2016; as sequências de 3 segmentos do genoma foram depositadas em GenBank sob os números de adesão MH016784 (segmento grande), MH016785 (segmento médio) e MH016786 (segmento pequeno). A sequência completa do genoma L tem 98 a 99% de identidades com os genomas correspondentes das três únicas outras sequências completas de Keystone virus L disponíveis em Genbank (KT630288).1, KX817321. 1, and KT630291.1). Da mesma forma, o completo M genoma tem 98 a 99% em comum com o correspondente M sequências (AF123489.1, KT630289.1, e KX817322.1) e 99% em comum com o correspondente S sequências do genoma (KT630293.1, U12801.1, e KT630290.1).

o Isolamento e a Visualização da Keystone Vírus em Células Cultivadas

Desde Keystone vírus vRNA foi detectado pelo imparcial de seqüenciamento (e, posteriormente, foi totalmente seqüenciado), foram feitas tentativas para isolar o vírus em uma linha de células conhecido para suportar o seu crescimento (células Vero) e no mouse neuroblastoma linha de células Neuro-2A; os dados suplementares fornecem uma descrição dos métodos completos. Os efeitos citopáticos mistos induzidos pelo vírus (EPC) foram evidentes nas células Neuro-2A 2 dias após a inoculação das células com urina, mas não com saliva, e o mesmo foi observado 1 dia depois nas células Vero E6. Após a subcultura, o EPC foi evidente 2 dias após a inoculação de células Vero E6 com meios usados a partir do Neuro-2A inoculado pela urina. o EPC induzido pelo KEYV formado em células Vero E6 é representado nas figuras suplementares S1A e S1B.; ambas as células Vero E6 inoculadas pela urina original e Vero E6 inoculadas com células Neuro-2A infectadas pelo vírus formaram o mesmo tipo de EPC. Os sobrenadantes das células infectadas pelo vírus foram positivos para o VRNA do KEYV por RT-PCR, enquanto os dos controlos mock-inoculados foram negativos para o VRNA do KEYV.

Para demonstrar active Keystone replicação do vírus, Vero E6 células exibindo significativa CPE (>70% da célula infectada camada única) 40 horas pós-infecção foram analisadas por microscopia eletrônica de transmissão, e foram apresentadas para demonstrar típico bunyavirus-induzida CPE e produção de progênie virions. Os métodos e imagens (figuras suplementares S2A–F) são incluídos nos dados suplementares.

COMENTÁRIO

KEYV, um negativo-sentido único-strand vírus RNA, é geralmente colocado em o que foi chamado de “Califórnia do Serogrupo” do gênero Orthobunyavirus, que inclui, entre outros, Califórnia encefalite vírus, Jamestown Canyon vírus, e La Crosse vírus da encefalite. KEYV, baseado em estudos realizados nas décadas de 1960 e 1970, parece estar difundido em áreas costeiras do sudeste dos Estados Unidos, com isolados identificados (em amostras de mosquitos e animais) da Baía de Chesapeake para o Texas. O organismo parece ter um número de hospedeiros vertebrados, incluindo, como observado anteriormente, a cinza de esquilo (30% de soropositividade em um estudo no Pokomoke Cipreste do Pântano, em Maryland ), guaxinins (18% de soropositivos no mesmo estudo), e whitetailed veado (10% de soropositivos no Maryland estudo; 2% de soropositivos em um estudo realizado no Texas ); parece ser rara em ave ou réptil populações. O vírus pode ser transmitido transovarialmente em mosquitos, com A. atlanticus aparentando ser um vetor primário (embora KEYV tenha sido identificado em outras espécies de Aedes e Culex ). O quadro que emerge é o de um vírus endémico de mosquitos e vertebrados florestais, embora de importância clínica incerta em populações animais.existe, portanto, a questão da relevância do KEYV para o ser humano. Os estudos de seroprevalência realizados há 50 anos, utilizando ensaios de neutralização viral, sugeriram que a seropositividade em populações humanas saudáveis se situava no intervalo de 20% . Os nossos dados demonstraram que as infecções humanas podem (e ainda podem) ocorrer, com vírus viáveis detectáveis na urina. Enquanto não podemos dizer definitivamente que o vírus foi responsável por exantema e febre notificada, nossos dados são claramente sugestivos, e aumentar a possibilidade de que uma parte do que são, de outra forma banal, erupção cutânea e febre casos observados cuidados de saúde primários em áreas costeiras do sudeste dos Estados Unidos, na verdade, refletir KEYV infecções. Muitos dos vírus do grupo da Califórnia têm sido ligados a encefalite e, como demonstrado neste relatório, o vírus cresce bem em linhas celulares de neuroblastoma; em casos de encefalite viral em que não é determinada etiologia, também pode valer a pena procurar infecções por KEYV. No caso atual, no contexto de preocupações sobre uma infecção por ZIKV, uma avaliação virológica abrangente resultou no isolamento do vírus; é altamente improvável que, fora de um cenário de pesquisa semelhante, ele alguma vez teria sido identificado. Os nossos resultados evidenciam a diversidade de potenciais patógenos arbovirais nesta região e sugerem que uma análise abrangente de possíveis patógenos virais deve incluir diagnósticos para KEYV.estão disponíveis Em Linha dados suplementares sobre Doenças Infecciosas Clínicas. Consistindo de dados fornecidos pelos autores para beneficiar o leitor, os materiais postados não são copiados e são da exclusiva responsabilidade dos autores, por isso as perguntas ou comentários devem ser dirigidos ao autor correspondente.

notas

apoio financeiro. Este trabalho foi apoiado por financiamento interno do Instituto de patógenos emergentes da Universidade da Flórida e do Departamento de Saúde Ambiental e Global, Faculdade de Saúde Pública e Profissões de saúde.potenciais conflitos de interesses. Todos os autores: nenhum conflito de interesses relatado. Todos os autores apresentaram o formulário ICMJE para divulgação de potenciais conflitos de interesses. Conflitos que os editores consideram relevantes para o conteúdo do manuscrito foram divulgados.

Bond
JO
Hammon
WM
Lewis
AL
Sather
GM
Taylor
DJ

. arbovírus do Grupo California na Flórida e relatório de uma nova estirpe, Keystone virus.

Saúde Pública Rep
1966

;

81

:

607

13

.

LeDuc
JW
Burger
JF
Eldridge
BF
Russell
CP

. Ecology of the Keystone virus, the transovarially maintained arbovirus

.

Ann N Y Acad Sci
1975

;

266

:

144

51

.

Sudia
WD
Newhouse
VF
Calisher
PC
Chamberlain
RW

.

California group arboviruses: isolations from mosquitoes in North America

.

Mosquito Notícias
1971

;

31

:

576

600

.

Issel
CJ
Hoff
GL
Treinador
VOLTAR

. sinais serológicos de infecção de veado-de-cauda-branca no Texas com três arbovírus do grupo da Califórnia (Jamestown Canyon, San Angelo e Keystone)

.

1973

9

:

245 div– –

8

.

Watts
DM
LeDuc
JW
Bailey
CL
Dalrymple
JM
Gargan
TP

II.

evidência Sorológica de Jamestown Canyon e a pedra angular infecção por vírus de vertebrados da Península DelMarVa

.

Am J Trop Med Hyg
1982

;

31

:

1245

51

.

Watts
DM
Bailey
CL
Roberts
NT
Tammariello
RF
Dalrymple
JM
Clark
GC

. Manutenção e transmissão do vírus Keystone por Aedes atlanticus (Diptera: Culicidae) e pelo esquilo cinzento no pântano Pocomoke Cypress, Maryland.

J Med Entomol
de 1988

;

25

:

493

500

.

Alugar
NÓS
Hammon
WM
Sather
GM

.

Review of current epidemiological literature on viruses of the California arbovirus group

.

Am J Trop Med Hyg
1972

;

21

:

964

78

.

Lednicky
J
Beau de Rochars
VM
ElBadry
M

, et al. surto do vírus Zika no Haiti em 2014: dados moleculares e clínicos

.

PLoS Negl Trop Dis
2016

;

10

:

e0004687

.

de Morais Bronzoni
RV
Baleotti
FG
Ribeiro Nogueira
RM
Nunes
M
Moraes Figueiredo
LT

.

Duplex reverse transcription-PCR seguido de testes de PCR aninhados para detecção e identificação de alfavírus e flavivírus brasileiros

.

J Piscar Microbiol
2005

;

43

:

696

702

.

© O(s) Autor (ES) 2018. Published by Oxford University Press for the Infectious Diseases Society of America. Todos os direitos reservados. Para as permissões, e-mail: [email protected] este artigo é publicado e distribuído nos termos da Oxford University Press, Standard Journals Publication Model (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

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