virusul Keystone izolat de un adolescent din Florida cu erupție cutanată și febră subiectivă: un alt Arbovirus Endemic în sud-estul Statelor Unite?

rezumat

virusul Keystone, un serogrup orthobunyavirus din California, a fost izolat pentru prima dată în 1964 de țânțarii din Keystone, Florida. Nu au existat rapoarte anterioare de izolare de la oameni, în ciuda studiilor care sugerează că ~20% dintre persoanele care trăiesc în regiune sunt seropozitive. Raportăm izolarea virusului de la un adolescent din Florida cu erupție cutanată și febră.

apariția virusului Zika (ZIKV) și identificarea continuă a virusului Chikungunya și a infecțiilor cu virusul Dengue au generat îngrijorări crescânde cu privire la endemicitate și răspândirea arbovirusurilor în Statele Unite. Virusul Keystone (KEYV; genul Orthobunyavirus, familia Peribunyaviridae), membru al serogrupului Orthobunyavirus California, a fost izolat pentru prima dată de țânțarii din Keystone, Florida (lângă Tampa Bay), în 1964 . Studiile ulterioare au demonstrat distribuția pe scară largă a virusului la țânțari, în special la Aedes atlanticus, precum și la veverițe, ratoni și căprioare cu coadă albă, în regiunile de coastă care se întind de la Golful Chesapeake spre sud prin Florida și până la vest Texas .

în studiile efectuate la populațiile umane în anii 1960, ratele de seropozitivitate au fost cuprinse între 19-21% . Cu toate acestea, izolarea reală a KEYV de la oameni nu a fost niciodată raportată și nici KEYV nu a fost legată de un sindrom clinic la om, în ciuda endemicității sale aparente la animale și țânțari.

raport de caz

Un bărbat în vârstă de 16 ani, anterior sănătos, a fost prezentat în August 2016 la o clinică de îngrijire urgentă din nord-centrul Floridei, cu antecedente de febră de grad scăzut și o erupție cutanată difuză. Pacientul a raportat că s-a simțit „cald” cu o seară înainte, cu o temperatură estimată de părinții săi să se situeze în intervalul ~100 unkt. O erupție papulară eritematoasă a apărut în dimineața prezentării, începând pe piept și răspândindu-se progresiv în abdomen, braț, spate și față. Nu au existat vezicule, iar erupția a fost nedureroasă și non-pruriginoasă. A fost agravată de căldură și de lumina soarelui. Pacientul a negat frisoane, dureri de cap, rigiditate a gâtului sau simptome gastro-intestinale. El a remarcat oboseala ușoară și disconfortul gleznei, pe care le-a atribuit participării concurente la o tabără de vară pentru participanții la fanfară, purtând pantofi noi de trupă. În săptămâna precedentă, pacientul a fost diagnosticat cu o posibilă amigdalită și a fost plasat pe terapie cu amoxicilină la 500 mg administrată oral de 3 ori pe zi, pe care a întrerupt-o a doua zi. Nu a avut antecedente medicale sau chirurgicale relevante; nu a cunoscut afecțiuni imunosupresoare sau congenitale; nu a cunoscut alergii; nu a călătorit recent în afara Floridei centrale; și nu a fost expus la ferme sau animale de fermă. El a primit toate imunizările recomandate în copilărie. Niciun alt membru al familiei nu era bolnav. Pacientul și familia sa s-au mutat în Florida din Kansas (unde virusul Keystone nu a fost identificat) cu 4 ani înainte de boala raportată. Tabăra trupei la care participa a continuat până seara și a raportat că a fost mușcat de mai multe ori de țânțari, în ciuda aplicării dietiltoluamidei (cunoscută în mod obișnuit sub numele de DEET).

la examinarea în clinică, el a avut o temperatură de 98,5 CTF (36,9 CTF), puls de 69 bătăi/minut, frecvență respiratorie de 12 respirații/minut și tensiune arterială de 122/82 mm / Hg. A fost observată o erupție papulară difuză, eritematoasă, a trunchiului, a brațului și a feței (Figura 1). Examinările capului, gâtului, respiratorii, cardiovasculare și abdominale ale pacientului au fost normale. Un test rapid Monospot efectuat la clinică a fost negativ. Cu acordul pacientului și al părinților săi, au fost colectate probe de salivă și urină. Erupția cutanată s-a rezolvat 2 zile mai târziu, fără febră suplimentară. Ulterior, el a luat amoxicilină fără apariția unei erupții cutanate.

Figura 1.

erupții cutanate observate la pacienții cu vârsta de 16 ani.

Figura 1.

erupții cutanate observate la pacienții cu vârsta de 16 ani.

identificare/izolare virală

transcripție inversă ecrane de reacție în lanț a polimerazei

deoarece pacientul a prezentat antecedente de erupții cutanate și febră în timpul unei perioade în care a apărut un focar de ZIKV în Florida, probele de salivă și urină au fost testate și au fost negative pentru ZIKV, virusul Chikungunya și virusul Dengue serotipul 1-4 acid ribonucleic genomic (ARN) prin transcripție inversă reacția în lanț a polimerazei (RT-PCR) . Posibilitatea unei etiologii alfavirus sau flavivirus a fost evaluată în continuare prin efectuarea RT-PCR folosind primeri universali care detectează alfavirusuri și flavivirusuri în Brazilia . Atât probele de salivă, cât și cele de urină au fost testate negativ pentru alphavirus și flavivirus vRNAs, în timp ce controalele pozitive au funcționat conform așteptărilor (datele nu sunt prezentate).

reacție în lanț a polimerazei cu transcripție inversă imparțială și secvențiere pentru identificarea agentului etiologic Viral presupus

o identitate prezumtivă a virusului a fost obținută în urma unei modificări a unei proceduri pe care am prezentat-o anterior ; metodele detaliate sunt furnizate în datele suplimentare care însoțesc această lucrare. ARN genomic Viral (și / sau acid dezoxiribonucleic ) au fost extrase din virioni folosind un Mini Kit de ARN Viral QIAamp (Qiagen Inc.). Ampliconii PCR au fost purificați (kit de purificare Qiagen QIAquick PCR) și A-Coadă cu ADN polimerază Taq (Biolabs din New England). Ampliconii PCR cu coadă A au fost apoi clonați TA, iar inserțiile secvențiate folosind secvențierea Sanger. Dintr-un total de 40 de plasmide cu inserții clonate TA (20 inserții din urină, 20 din salivă), 1 din urină conținea o inserție de 166-bp cu o identitate de 99% a secvențelor genomului mic al virusului Keystone depuse la GenBank (KT630293.1, U12801.1 și KT630290.1).

secvențierea directă a virusului Keystone în urină

deoarece există numeroase orthobunyavirusuri și primerii RT-PCR publicați pentru secvențierea KEYV nu au fost disponibili, virusul a fost secvențiat folosind primeri proiectați pe baza a 3 genomi disponibili, completi ai virusului Keystone în GenBank. Secvențierea a fost realizată folosind o strategie de mers pe jos a genomului, cu primerii PCR descriși în tabelul suplimentar 1; metodele noastre complete sunt incluse în datele suplimentare. Secvența a fost desemnată ca KEYV / Homo sapiens / Gainesville-1/2016; cele 3 secvențe ale segmentului genomului au fost depuse în GenBank sub numerele de aderare MH016784 (segment mare), MH016785 (segment mediu) și MH016786 (segment mic). Secvența completă a genomului l are identități de 98 până la 99% cu genomii corespunzători ai doar 3 alte secvențe complete de virus Keystone L disponibile în Genbank (KT630288.1, KX817321. 1 și KT630291.1). În mod similar, genomul m complet are 98 până la 99% în comun cu secvențele m corespunzătoare (AF123489.1, KT630289.1 și KX817322.1) și 99% în comun cu secvențele genomului s corespunzătoare (KT630293.1, U12801.1 și KT630290.1).

izolarea și vizualizarea virusului Keystone în celulele cultivate

deoarece virusul Keystone vRNA a fost detectat prin secvențiere imparțială (și ulterior a fost complet secvențiat), s-au făcut încercări de a izola virusul într-o linie celulară cunoscută pentru susținerea creșterii sale (celule Vero) și în linia celulară neuroblastom de șoarece Neuro-2a; o descriere a metodelor complete este furnizată în datele suplimentare. Efectele citopatice mixte induse de Virus (CPE) au fost evidente în celulele Neuro-2A la 2 zile după inocularea celulelor cu urină, dar nu cu saliva, și același lucru a fost observat 1 zi mai târziu în celulele Vero E6. La subcultură, CPE au fost evidente la 2 zile după inocularea celulelor Vero E6 cu medii uzate din Neuro-2a inoculate în urină. CPE indus de KEYV format în celulele Vero E6 sunt reprezentate în figurile suplimentare S1A și S1B; atât celulele Vero E6 originale inoculate în urină, cât și celulele Vero E6 inoculate cu celule neuro-2a infectate cu virus au format același tip de CPE. Supernatanții celulelor infectate cu virus au fost pozitivi pentru keyv vRNA prin RT-PCR, în timp ce cei din controalele simulate au fost negativi pentru KEYV vRNA.

pentru a demonstra replicarea activă a virusului Keystone, celulele Vero E6 care prezintă CPE semnificativ (>70% din monostratul celular infectat) la 40 de ore după infecție au fost analizate prin microscopie electronică de transmisie și s-a demonstrat că demonstrează CPE tipic indus de bunyavirus și producția de virioni descendenți. Metodele și imaginile (figurile suplimentare S2A–F) sunt incluse în datele suplimentare.

COMMENT

KEYV, un virus ARN cu un singur fir cu sens negativ, este în general plasat în ceea ce a fost numit „serogrupul California” al genului Orthobunyavirus, care include, printre altele, virusul encefalitei din California, virusul Jamestown Canyon și virusul encefalitei La Crosse. KEYV, bazat pe studii efectuate în anii 1960 și 1970, pare a fi răspândit în zonele de coastă din sud-estul Statelor Unite, cu izolate identificate (în eșantioane de țânțari și animale) din Golful Chesapeake până în Texas. Organismul pare să aibă un număr de gazde vertebrate, inclusiv, după cum sa menționat anterior, veverița cenușie (30% seropozitivitate într-un studiu din mlaștina chiparosului Pokomoke din Maryland ), ratonii (18% seropozitivi în același studiu) și căprioarele albe (10% seropozitivi în studiul din Maryland; 2% seropozitivi într-un studiu din Texas ); pare a fi rară la populațiile de păsări sau reptile. Virusul poate fi transmis transovarial la țânțari, cu A. atlanticus care pare a fi un vector primar (deși KEYV a fost identificat la alte specii Aedes și Culex ). Imaginea care apare este cea a unui virus endemic pentru țânțari și vertebrate de pădure, deși cu o semnificație clinică incertă la populațiile de animale.

există, atunci, problema relevanței KEYV pentru oameni. Studiile de seroprevalență efectuate acum 50 de ani folosind teste de neutralizare virală au sugerat că seropozitivitatea la populațiile umane sănătoase a fost în intervalul de 20% . Datele noastre au demonstrat că infecțiile umane pot (și încă apar), cu virus viabil detectabil în urină. Deși nu putem spune cu siguranță că virusul a fost responsabil pentru erupția cutanată și febra raportată, datele noastre sunt în mod clar sugestive și ridică posibilitatea ca o parte din ceea ce sunt altfel neremarcabile erupții cutanate și febră cazuri observate în setările de îngrijire primară în zonele de coastă din sud-estul Statelor Unite reflectă de fapt infecții KEYV. Multe dintre virusurile din grupul din California au fost legate de encefalită și, după cum sa demonstrat în acest raport, virusul crește bine în liniile celulare de neuroblastom; în cazurile de encefalită virală în care nu este determinată nici o etiologie, poate fi utilă și căutarea infecțiilor KEYV. În cazul actual, în stabilirea preocupărilor cu privire la o infecție cu ZIKV, o evaluare virologică cuprinzătoare a dus la izolarea virusului; este foarte puțin probabil ca, în afara unui cadru de cercetare similar, să fi fost identificat vreodată. Constatările noastre subliniază diversitatea potențialilor agenți patogeni arbovirali din această regiune și sugerează că o analiză cuprinzătoare a posibililor agenți patogeni virali ar trebui să includă diagnosticul pentru KEYV.

date suplimentare

materiale suplimentare sunt disponibile la Clinical Infectious Diseases online. Constând în date furnizate de autori în beneficiul cititorului, materialele postate nu sunt copiate și sunt responsabilitatea exclusivă a autorilor, astfel încât întrebările sau comentariile trebuie adresate autorului corespunzător.

Note

sprijin financiar. Această lucrare a fost susținută de finanțare internă de la Institutul de agenți patogeni emergenți al Universității din Florida și de la Departamentul de mediu și sănătate globală, Colegiul de Sănătate Publică și profesii în sănătate.

potențiale conflicte de interese. Toți autorii: nu au fost raportate conflicte de interese. Toți autorii au depus formularul ICMJE pentru dezvăluirea potențialelor conflicte de interese. Conflictele pe care editorii le consideră relevante pentru conținutul manuscrisului au fost dezvăluite.

Bond
JO

,

Hammon
WM

,

Lewis
AL

,

Sather
GE

,

Taylor
DJ

.

Arbovirusurile grupului California din Florida și raportul unei noi tulpini, virusul Keystone

.

Sănătate Publică Rep
1966

;

81

:

607

13

.

LeDuc
JW

,

Burger
JF

,

Eldridge
BF

,

Russell
PK

.

ecologia virusului Keystone, arbovirusul menținut transovarial

.

Ann N Y Acad Sci
1975

;

266

:

144

51

.

Sudia
WD

,

Newhouse
VF

,

Calisher
CH

,

Chamberlain
RW

.

arbovirusuri din grupul California: izolații de la țânțarii din America de Nord

.

Mosquito News
1971

;

31

:

576

600

.

Issel
CJ

,

Hoff
GL

,

Trainer
înapoi

.

dovezi serologice de infecție a căprioarelor cu coadă albă din Texas cu trei arbovirusuri din grupul California (Jamestown Canyon, San Angelo și Keystone)

.

J Wildl Dis
1973

;

9

:

245

8

.

Watts
DM

,

LeDuc
JW

,

Bailey
CL

,

Dalrymple
JM

,

Gargan
TP

ii.

dovezi serologice ale Jamestown Canyon și infecția cu virusul Keystone la vertebratele din Peninsula Delmarva

.

Am J Trop med Hyg
1982

;

31

:

1245

51

.

Watts
DM

,

Bailey
CL

,

Roberts
NT

,

Tammariello
RF

,

Dalrymple
JM

,

Clark
GC

.

menținerea și transmiterea virusului Keystone de către Aedes atlanticus (Diptera: Culicidae) și veverița cenușie din mlaștina Pocomoke Cypress, Maryland

.

J Med Entomol
1988

;

25

:

493

500

.

Parkin
noi

Hammon

WM

,

Sather
GE

.

Revizuirea literaturii epidemiologice actuale privind virusurile grupului Arbovirus din California

.

Am J Trop med Hyg
1972

;

21

:

964

78

.

Lednicky
J

,

Beau de Rochars
VM

,

ElBadry
M

și colab.

focar de virus Zika în Haiti în 2014: date moleculare și clinice

.

PLoS Negl Trop Dis
2016

;

10

:

e0004687

.

de Morais Bronzoni
RV

Baleotti

FG

,

Ribeiro Nogueira
RM

,

Nunes
m

,

Moraes Figueiredo
lt

.

transcriere inversă Duplex-PCR urmată de teste PCR imbricate pentru detectarea și identificarea alfavirusurilor și flavivirusurilor braziliene

.

J Blink Microbiol
2005

;

43

:

696

702

.

XV autorul(II) 2018. Publicat de Oxford University Press pentru Societatea de Boli Infecțioase din America. Toate drepturile rezervate. Pentru permisiuni, e-mail: [email protected]
acest articol este publicat și distribuit în conformitate cu Termenii Oxford University Press, standard Journals Publication Model (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.